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免疫組化中抗體選擇要求

點(diǎn)擊次數(shù)：11736 發(fā)布時(shí)間：2024/4/26 10:22:36

1、一抗選擇

（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。

由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精-確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱(chēng)為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)較小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低，而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。

（2）種屬來(lái)源。

家兔來(lái)源的抗體多是多克隆，而小鼠來(lái)源的抗體多是單克隆，但也有例外。根據(jù)此來(lái)源選擇相應(yīng)的二抗。

（3）種屬反應(yīng)性的選擇。

這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差異，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。

（4）能否做免疫組化。

一抗說(shuō)明書(shū)都會(huì)注明做WB、IHC、ICC、IF等，建議選擇注明的抗體（經(jīng)過(guò)文章證明）。

（5）檢測(cè)標(biāo)本類(lèi)型。

用于檢測(cè)石蠟切片還是冰凍切片，一般能做石蠟切片的抗體，都可用來(lái)檢測(cè)冰凍切片，但能做冰凍切片的抗體，不一定能檢測(cè)石蠟切片中的抗原。

2、二抗選擇

（1）種屬來(lái)源。

主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)源，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標(biāo)記物的選擇。

有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物，一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記為二抗，與后面的SP結(jié)合反應(yīng)；而免疫熒光染色就需要購(gòu)買(mǎi)不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。（這主要與后面有無(wú)三抗和三抗種類(lèi)有關(guān)）。

（3）選擇IgM還是IgG。

一抗是IgM，二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。

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